右归饮含药血清对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用及其microRNA表达谱分析

• 作 者: 陈祁青[1]金红婷[2]应俊[1]王萍儿[2]吴承亮[2]童培建[3]肖鲁伟[2]
• 机 构: 浙江中医药大学第一临床医学院,杭州310053
• 出 处: 第六届全国中医药博士生学术论坛
• 发表日期: 2015年期

目的:观察右归饮含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的效应,分析此过程中的microRNA表达谱变化,探讨右归饮含药血清促进BMSCs成软骨分化的分子机制.
方法:体外培养大鼠BMSCs,经TGF-β 1基因慢病毒转染后48h给开始右归饮含药血清干预,培养7d,采用Ⅱ型胶原免疫组化染色、甲苯胺蓝染色、Real time PCR方法检测Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达.采用microRNA芯片技术和生物信息学方法,分析差异microRNA表达谱变化,预测关键microRNA、信号通路及靶基因.
结果:TGF-β1基因成功转染BMSCs并能稳定表达.转染组和右归饮组的甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性,空载组染色均为阴性;与空载组比较,转染组和右归饮组Ⅱ型胶原mRNA、聚集蛋白聚糖mRNA的表达上调(P＜0.01);与转染组比较,右归饮组Ⅱ型胶原mRNA、聚集蛋白聚糖mRNA的表达上调(P＜0.01).右归饮组与转染组相比,17个microRNA个显著上调,2个microRNA显著下调(P＜0.05,丨fold change丨≥0.585).miR-24-3p、MAPK信号通路及MAPK13、MAPK14、TRAF6、MAP3K7基因被预测为关键microRNA、信号通路及靶基因.
结论:右归饮含药血清能较好地促进BMSCs成软骨分化,右归饮通过上调miR-24-3p阻断MAPK信号通路可能发挥了重要作用.