【摘 要】
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目的构建化因子受体CCR反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法用RT-PCR从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中获得目的基因,并以正.反两个方向定向插
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目的构建化因子受体CCR<,5>反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法用RT-PCR从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中获得目的基因,并以正.反两个方向定向插入到逆转录病毒载体pLXSN.重组载体用脂质体转染剂(lipofectAMINE)转染PA317包装细胞,抗G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(FQ-PCR)测定假病毒滴度,进一步感染NIH/3T3细胞.结果CCR<,5>正、反义RNA的真核表达载体,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/313细胞,目的基因在该细胞中得到整合与表达.结论从PBMCs中获得的目的基因通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达,为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础.
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