【摘 要】
：
目的:探讨应用DNA载体介导RNA干扰技术,抑制鼻咽癌细胞中EB病毒(Epstein-Barr virus)潜伏膜蛋白1(latent membrane protein-1,LMP-1)表达的可能性,并观察LMP-1基因沉默对鼻咽
【机 构】
：
南方医科大学附属南方医院耳鼻咽喉科,510515,广州
论文部分内容阅读
目的:探讨应用DNA载体介导RNA干扰技术,抑制鼻咽癌细胞中EB病毒(Epstein-Barr virus)潜伏膜蛋白1(latent membrane protein-1,LMP-1)表达的可能性,并观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响.
方法:设计合成针对EB病毒LMP-1基因的短链干扰RNA(small hairpin RNA,siRNA),利用脂质体转染导入EB病毒(+)的鼻咽癌细胞C611,用半定量RT-PCR检测LMP-1 mRNA水平的变化,筛选出能有效抑制LMP-1表达的siRNA序列筛选出最佳RNA干扰序列.根据此序列合成能转录出干扰RNA的DNA模板插入pAVU6+27质粒,构建能够介导RNA干扰的发夹状干扰RNA(small hairpin RNA,shRNA)DNA表达载体.采用磷酸钙共沉淀法将质粒导入C611细胞,G418筛选找到LMP-1基因沉默的亚克隆C611L,通过胰酶消化后细胞脱落时间,观察贴壁生长能力的变化,肿瘤细胞穿膜实验分析细胞基底膜穿透能力与对照组的差异,采用划痕时间观察细胞移动能力的改变,以检测LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响.
结果:导入有效干扰siRNA后,C611细胞中LMP-1 mRNA水平下降90％以上.在shRNA表达载体有效转染的C611细胞中,也能对LMP-1基因的表达产生稳定的抑制.肿瘤细胞转移实验表明,LMP-1基因沉默的C611L细胞在胰酶消化后,脱落时间延长;相同时间内穿过人工基底膜的和移动到划痕生长的细胞数量较对照组减少.说明C611L细胞贴壁生长能力提高,基底膜穿透能力和细胞移动能力下降.
结论:RNA干扰能够有效抑制EB病毒LMP-1基因在鼻咽癌细胞中的表达.shRNA表达载体能够在鼻咽癌细胞内介导RNA干扰,并获得对LMP-1基因稳定的抑制.LMP-1基因可能通过贴壁生长能力,基底膜穿透能力和细胞移动能力等不同方面影响鼻咽癌细胞的转移.
其他文献
一九八二年三月十日,因修缮杨开慧同志故居,在她的住房后墙砖缝中发现开慧同志的手稿七篇,合计十二页,约四千二百余字。七月下旬省文化局根据省委指示,组织专门小组对手稿进
目的 探讨应用沐舒坦治疗新生儿肺炎的临床疗效及其血气指标的变化情况.方法 选择2011年4月至2014年-4月医院收治的140例新生儿肺炎患者作为研究对象,按随机数字表法分为研究
玻璃钢材料在化学介质与应力、热等因素联合作用下,结构和性能可能发生变化从而降低或丧失使用性能,其中应力腐蚀开裂是导致玻璃钢管发生脆性断裂而失效的主要原因之一.在研
在川东北高酸性天然气田开发过程中,部分气井使用了718镍铬合金井下工具,与在用的普通抗硫油管之间可能发生电偶腐蚀.为进一步了解川东北高酸性天然气田普遍使用的VM80SS抗硫
目的对东南亚型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(Southeast Asian hereditary persistence of fetal hemoglobin,SEA-HPFH)的患者进行突变检测并分析其临床特征。方法对2012
在管道智能清管检测结果的基础上,采用先进可靠的腐蚀检测技术,采集了土壤腐蚀性、涂层破损、阴极保护等大量的相关数据.采用DPS专业数据分析软件的分析模块,筛选出对土壤腐
目的:DNA修复酶-6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)的高表达是肿瘤对亚硝脲等烷化剂产生耐药性的重要机制,目前的研究已经证实MGM
目的通过儿童的染色体核型结果分析,统计出生缺陷情况,采取有效措施,预防新生儿缺陷的出生,提高分娩质量。方法 2014年1月1日至2015年10月31日,对前来我院遗传门诊就诊的1689
本文通过对雅克拉凝析气田腐蚀因素调查分析,找出了影响该气田正常生产的主要腐蚀因素,并对相关因素展开了腐蚀规律研究,取得了满意的研究结果.同时,针对雅克拉凝析气田的腐
在采用团簇线判据优化设计Cu-Zr-Al非晶合金成分的基础上,采用激光熔覆技术在AZ91HP镁合金表面制备了Cu-Zr-Al合金涂层.研究结果表明,合金涂层是由非晶、Cu8Zr3和Cu10Zr7相所