【摘 要】
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用限制性核酸内切酶EcoR I和sal I双酶切含有大肠杆菌耐热性肠毒素ST前体蛋白基因的质粒pXST，回收325bp的ST基因片段，然后，通过TDNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理
【机 构】
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农学院(银川)军农牧大学军事兽医研究所(长春)
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用限制性核酸内切酶EcoR I和sal I双酶切含有大肠杆菌耐热性肠毒素ST<,1>前体蛋白基因的质粒pXST<,1>，回收325bp的ST基因片段，然后，通过TDNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的带有产气英膜梭菌β-毒素基因（CPB）的重组质粒pECB2中CPB基因的下降，转化受体菌BL<,21>（DE<,3>）中，经BamH I和EcoR I酶切反应鉴定重组质粒，得到了理想重组质粒pECB-ST<,1>。重组菌株BL<,21>（DE<,3>）（pECB-ST<,1>）经IPTG诱导后，其表达产物经SDS-PAGE、Western－blotting及ELISA检测，结果表明重组菌株可以表达CPB-ST融合蛋白，而且该融合蛋白无天然β-毒素和ST<,1>的生物毒性。
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