【摘 要】
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目的：利用SMART (Switching Mechanism At 5 end of RNA Transcript Method)技术,构建高质量的白念珠菌菌丝相(芽管)全长cDNA文库.方法：不完全1640培养基诱导高于95％的白念
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目的：利用SMART (Switching Mechanism At 5 end of RNA Transcript Method)技术,构建高质量的白念珠菌菌丝相(芽管)全长cDNA文库.方法：不完全1640培养基诱导高于95％的白念珠菌带芽管孢子,提取总RAN并纯化poly A+RNA作为模板,应用SMART技术利用SMARTScribeTM MMLV反转录酶和经修饰的oligo (dT)引物(CDS Ⅲ/3 PCR引物)合成第一链cDNA,SMARTⅣTM寡核苷酸作为mRNA 5端延伸出去的模板,采用LD-PCR合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切及过柱分级分离后,与λTriplE×2载体连接经噬菌体包装后转导大肠杆菌,构建全长cDNA文库.结果：原始菌丝相白念珠菌cDNA噬菌体表达文库滴度为1.87×107pfu/ml,重组率达100％,库容量9.35×106；文库扩增后,滴度达5×109pfu/ml,插入cDNA长度多在0.4～2.5kb,平均长度在1.5kb左右.文库的代表性和重组片段的序列完整性均达建库要求.结论：成功构建了菌丝相白念珠菌cDNA噬菌体表达文库,为进一步筛选和克隆白念珠菌芽管特异性抗原表达基因及致病性相关基因奠定了基础.
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