【摘 要】
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目的 核酸适配子在疾病诊断中具有重要意义.在前期工作中我们筛选出一组针对肝癌血清的核酸适配子,能特异性结合肝癌血清.本研究旨在建立一种基于中性聚丙烯酰胺凝胶电泳及灰度分析的核酸适配子诊断应用方法 ,为适配子在肝癌诊断中的应用提供一种简便有效的新方法 .方法 人工合成适配子并配制适配子溶液；以等差梯度适配子量进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、GelRed染色、适配子带灰度测定,确定适配子的合适用量；以合适用量
【机 构】
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南昌大学第一附属医院消化内科,江西省消化疾病研究所,南昌330006
【出 处】
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第二十五届全国中西医结合消化系统疾病学术会议
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目的 核酸适配子在疾病诊断中具有重要意义.在前期工作中我们筛选出一组针对肝癌血清的核酸适配子,能特异性结合肝癌血清.本研究旨在建立一种基于中性聚丙烯酰胺凝胶电泳及灰度分析的核酸适配子诊断应用方法 ,为适配子在肝癌诊断中的应用提供一种简便有效的新方法 .方法 人工合成适配子并配制适配子溶液；以等差梯度适配子量进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、GelRed染色、适配子带灰度测定,确定适配子的合适用量；以合适用量的适配子与等差梯度体积的肝癌混合血清孵育后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、GelRed染色、游离适配子带灰度测定,以确定血清标本的合适用量；以适配子的合适用量与血清标本的合适用量为中心进行正交试验,分别检测肝癌和正常混合血清,确定最佳的适配子和血清用量；以最佳的适配子用量与血清用量为条件进行临床标本检测,测定游离适配子带的绝对灰度指标(灰度、框选面积、平均灰度、标准差和平均背景),并计算相对灰度指标(灰度比值、信噪比、平均净灰度和变异系数),评价各指标对肝癌的诊断价值.结果 本研究以适配子AP-HCS-9-90为模型,确定的最佳适配子用量为5pmol,最佳血清标本用量为4μl,以此条件检测了34例肝癌血清标本和36例非肝癌血清标本(肝硬化9例,乙肝9例,正常人18例).各项绝对灰度指标和相对灰度指标在肝癌与非肝癌之间均存在明显差异(P=0.044～0.000),受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.657～1.000(其中7项指标＞0.8),诊断肝癌的敏感度为61.8％～100.0％(其中4项指标＞80％),特异度为61.1％～100.0％(其中6项指标＞80％),准确度为64.3％～100.0％(其中6项指标＞80％),阳性预测值为62.1％～100.0％(其中6项指标＞80％),阴性预测值为66.6％～100.0％(其中6项指标＞80％),结论 创建起基于聚丙烯酰胺凝胶电泳及灰度分析的核酸适配子诊断应用技术,能有效应用于肝癌血清核酸适配子的诊断应用研究.
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