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人工免疫是防治鱼类传染性疾病的有效措施之一,然而疫苗免疫后诱导的免疫反应是一个极为复杂的过程,机体能否产生免疫力及免疫力的强弱又与多种因素相关.灭活病毒疫苗在鱼类传染病防治中已有很多应用,但是对其诱导的免疫机制报道较少.本文采用了3种常用的灭活化学试剂,分别为常规使用最为广泛的0.2％Formalin,BEI(binary ethylenimine)以及BPL(β-propiolactone)并分别建立了该3种试剂对CHNV(crucian carp hematopoietic necrosis virus)的灭活流程.经过细胞培养以及滴度测定后,发现3种试剂方法均可将病毒完全灭活.3种方法的灭活病毒分别免疫黑鲫鱼鱼体结果发现,此3组免疫组的CD8阳性T细胞、CD4阳性T细胞以及sIgM阳性细胞亚群在脾、肾中各比例呈现不同趋势的变化.最后,运用流式细胞分选仪对以上各淋巴细胞亚群分选后,检测IFNγ1、IFNγ2各细胞因子以及细胞因子转录调节因子GATA3、T-bet、IL-10的表达进行了实时定量检测.