【摘 要】
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目的：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用及归巢能力的影响，并探讨LIF因子在信号通路方面发挥作用的分子机制。方法：建立转hLIF基因
【机 构】
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苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室 江苏 苏州 215123
【出 处】
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第17届全国干扰素及细胞因子学术会议
论文部分内容阅读
目的：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，观察对CD34+造血干/祖细胞的扩增作用及归巢能力的影响，并探讨LIF因子在信号通路方面发挥作用的分子机制。方法：建立转hLIF基因腺病毒载体的饲养层细胞，并用RT-PCR法鉴定目的基因；采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞，流式细胞术检测纯度；将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养，流式细胞术检测各组增殖效果；用LIF因子激活的JAK/STAT信号通路的阻断剂AG490作用于共培养的各组细胞，流式细胞术检测阻断后各组的增殖效果。结果：建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光，RT-PCR法证实有目的基因表达，免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达92.9±4.51％，与饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干，祖细胞可扩增16.51倍，培养后的细胞用Transwell板做体外迁移实验，与转基因饲养层细胞共培养的干细胞，其诱导迁移率为40.76±1.69％，明显高于对照组，可以较好的保持其归巢能力。AG490阻断后干细胞的增殖能力明显下降。结论：建立的转hLIF基因腺病毒载体饲养层细胞可以有效的扩增脐血CD34+造血干/祖细胞，延缓其分化，并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力，LIF因子通过激活JAK/STAT信号通路维持造血干/祖细胞的增殖和归巢能力。
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