【摘 要】
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本研究以菊花品种神马为材料,对影响其cDNA-AFLP分析体系的几个关键因素进行了探索和分析,建立了适于菊花的cDNA-AFLP分析体系.结果表明:TRNzol法提取的RNA较完整,纯度较高;采用Oligo(dT)18 Primer及经过改造和优化的BeyoRT M-MuLV反转录酶得到ds cDNA,将1μg的cDNA利用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ快速双酶切5 min,连接产物稀释10倍作为预扩增
【机 构】
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山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室,泰安271018
【出 处】
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中国园艺学会观赏园艺专业委员会2011年学术年会
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本研究以菊花品种神马为材料,对影响其cDNA-AFLP分析体系的几个关键因素进行了探索和分析,建立了适于菊花的cDNA-AFLP分析体系.结果表明:TRNzol法提取的RNA较完整,纯度较高;采用Oligo(dT)18 Primer及经过改造和优化的BeyoRT M-MuLV反转录酶得到ds cDNA,将1μg的cDNA利用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ快速双酶切5 min,连接产物稀释10倍作为预扩增反应的模板,扩增30个循环,其检测结果较理想;预扩增产物稀释50倍作为模板,采用Touchdown程序,选用64对AFLP引物进行选择性扩增;扩增产物经6％的PAGE电泳后采用改进的快速银染体系,筛选出多态性条带丰富的AFLP引物49对,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP凝胶图谱.本研究建立的反应体系适用于菊花功能基因的cDNA-AFLP研究.
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