【摘 要】
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利用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁分离物(Cucumber green mottle mosaic virus Liaoning isolate, CGMMV-LN)外壳蛋白CP基因,并克隆到pMD-18T载体上.将CP基因插
【机 构】
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福建省农业科学院果树研究所,福州350013
【出 处】
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中国植物病理学会2010年学术年会
论文部分内容阅读
利用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁分离物(Cucumber green mottle mosaic virus Liaoning isolate, CGMMV-LN)外壳蛋白CP基因,并克隆到pMD-18T载体上.将CP基因插入原核表达载体pET-32a(+)并确证性序列测定,重组质粒pET-32aCP转化大肠杆菌BL21(DE3) pLysS菌株.SDS-PAGE分析显示,CP融合蛋白在IPTG诱导下获得可溶表达,其融合蛋白分子量为37.5 kDa.融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后作为抗原免疫健康白兔制备抗体,Western印迹分析和ELISA效价测定表明,该抗体具有很强的特异性,其效价高达1∶51200,这为黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测及其外壳蛋白的功能研究奠定了基础.
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