【摘 要】
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目的：制备一种具有缓释功能的促进牙槽骨再生材料,并探讨其在体内外促进骨再生作用.方法：利用经典磷酸钙共沉淀方法制备磷酸钙-基因复合物,通过SEM、DLS分析所制备基因复合物的形态及尺寸分布；运用W/O/W复乳溶剂蒸发法将磷酸钙-BMP-2基因复合物包入PLGA微球内,通过SEM、TEM、紫外分光光度计,讨论了载基因PLGA微球形貌、尺寸、载药量及释放规律；将载EGFP基因PLGA微球和MC3T3-
【机 构】
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吉林大学口腔医学院,吉林省长春市,130041 吉林大学化学学院,吉林省长春市,130021
【出 处】
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2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛
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目的：制备一种具有缓释功能的促进牙槽骨再生材料,并探讨其在体内外促进骨再生作用.方法：利用经典磷酸钙共沉淀方法制备磷酸钙-基因复合物,通过SEM、DLS分析所制备基因复合物的形态及尺寸分布；运用W/O/W复乳溶剂蒸发法将磷酸钙-BMP-2基因复合物包入PLGA微球内,通过SEM、TEM、紫外分光光度计,讨论了载基因PLGA微球形貌、尺寸、载药量及释放规律；将载EGFP基因PLGA微球和MC3T3-E1细胞共培养,检测基因活性是否保留；将载BMP-2基因PLGA和MC3T3-E1细胞共培养,在1d、3d、7d、14d通过real-time qPCR检测成骨相关基因ALP、Rux2、COL-Ⅰ、SP7mRNA水平的变化；将载BMP-2基因PLGA微球植入异位成骨模型大鼠肌囊中,分别于4w、8w通过软X线和组织学分析植药部位骨形成情况.结果：SEM结果显示：磷酸钙微粒尺寸为100nm左右,和基因复合后尺寸为200-300nm左右；载BMP基因微球尺寸为2.0 ～ 7.0 μm,TEM结果显示微球内包含有尺寸为300nm左右的团块样物质,衍射分析为晶体.包封率可达30～50％,24 h内突释率＜7.5％,30天内累积释药量为46.8％.载EGFP基因PLGA微球和MC3T3-E1细胞共培养1d后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,说明基因包入PLGA微球后在一定程度上仍能保持其生物学活性RT-qPCR结果显示载BMP-2基因PLGA微球与MC3T3-E1细胞共培养在3天到14天各个时间点的ALP、Runx2、Col-Ⅰ和SP7 mRNA表达水平较对照组均有不同程度的提高.体内实验结果显示：实验组在8周时软X线检查可见明显高密度影,对照组密度均一无明显高密度影；组织学结果显示实验组植药部位可见大量的骨髓样细胞、成骨样细胞和骨样细胞,对照组植药部位有部分异物巨细胞,未见骨样细胞、成骨样细胞等.结论：利用W/O/W复乳溶剂蒸发法制备的载BMP基因的PLGA微球体外可保持基因活性,促进成骨细胞前体细胞向成骨细胞分化；体内可在非骨组织区域实现异位成骨.因此所制备的促骨再生材料将在促进骨形成,增加牙槽骨骨量方面有很大的应用前景.
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