【摘 要】
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目的：探讨周期性机械牵张应力作用下,人软骨细胞中新型机械激活离子通道Piezo1蛋白与细胞骨架F-actin肌动蛋白的联系.材料和方法：利用Ⅱ型胶原酶与胰蛋白酶双酶消化法体外分离、培养骨性关节炎病人软骨细胞,然后利用FLEX公司设计并生产的多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T建立人骨性关节炎的退变软骨细胞的牵张应力模型,将仪器设置为0.5HZ的加载频率,20％的细胞表面牵张率.根据预实验结果
【出 处】
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中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会
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目的：探讨周期性机械牵张应力作用下,人软骨细胞中新型机械激活离子通道Piezo1蛋白与细胞骨架F-actin肌动蛋白的联系.材料和方法：利用Ⅱ型胶原酶与胰蛋白酶双酶消化法体外分离、培养骨性关节炎病人软骨细胞,然后利用FLEX公司设计并生产的多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T建立人骨性关节炎的退变软骨细胞的牵张应力模型,将仪器设置为0.5HZ的加载频率,20％的细胞表面牵张率.根据预实验结果分成0h牵张应力组,2h牵张应力组,12h牵张应力组,24h牵张应力组,48h牵张应力组和相应的抑制剂GsMTx4组以及细胞松弛素D组.免疫组化鉴定软骨细胞的Aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白的表达,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同力学条件刺激下各机械牵张应力组人骨性关节炎体外软骨细胞模型的新型机械激活离子通道Piezo1的mRNA的相对表达量.以及细胞松弛素D作用下新型机械激活离子通道Piezo1的mRNA的相对表达量.激光共聚焦显微镜下免疫荧光定位人骨性关节炎退变软骨细胞体外力学模型中新型机械激活离子通道Piezo1蛋白的表达位置,利用鬼笔环肽共染人骨性关节炎软骨细胞的细胞骨架F-actin蛋白的表达及与机械牵张应力的表达关系,同时激光共聚焦显微镜观察各组细胞的细胞骨架以及Piezo1蛋白的表达水平.
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