【摘 要】
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甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是2型猪链球菌细胞壁上的一种重要蛋白质,可能与该菌的致病性密切相关。为寻找与GAPDH相互作用的受体蛋白,以研究2型猪链球菌的分子致病机理,本实
【机 构】
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华中农业大学动物医学院,武汉,湖北,430070
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是2型猪链球菌细胞壁上的一种重要蛋白质,可能与该菌的致病性密切相关。为寻找与GAPDH相互作用的受体蛋白,以研究2型猪链球菌的分子致病机理,本实验根据GenBank中公布的gapdh基因序列(登陆号:AY167026)设计一对引物,以2005年四川分离的2型猪链球菌(SC19)基因组为模板,利用PCR扩增gapdh基因,扩增片段大小为1011bp,测序结果与公布的序列100％同源.构建了表达质粒pET-gapdh,并成功在大肠杆菌BL21中表达大小约为41kDa的融合蛋白GAPDH,与预期结果相符.通过Western blot检测,证实GAPDH具有良好的免疫学活性,应用纯化的GAPDH蛋白,制备了兔抗GAPDH蛋白的多克隆抗体。运用配体重叠技术(ligand-overlayapproach),初步寻找到了一个HeLa细胞中可能与GAPDH蛋白作用的受体蛋白,为进一步研究2型猪链球菌的分子致病机理奠定了一定的基础。
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