【摘 要】
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目的:确定HSV1候选亚单位疫苗gD蛋白(gD1)的最佳配伍佐剂、免疫剂量以及免疫程序.方法:使用不同佐剂(PBS、Alum、Poly I:C及Alum&Poly I:C)配伍不同剂量的gD1蛋白(2μg、10μg、30μg/只),制成12种注射制剂,后肢肌肉注射免疫随机分组的12组BALB/c小鼠,初次免疫后于第14、35天各加强免疫一次,每次免疫前及末次免疫后两周眼眶静脉窦取血,分离血清后使用
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,南京210002 南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,南京210
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的:确定HSV1候选亚单位疫苗gD蛋白(gD1)的最佳配伍佐剂、免疫剂量以及免疫程序.
方法:使用不同佐剂(PBS、Alum、Poly I:C及Alum&Poly I:C)配伍不同剂量的gD1蛋白(2μg、10μg、30μg/只),制成12种注射制剂,后肢肌肉注射免疫随机分组的12组BALB/c小鼠,初次免疫后于第14、35天各加强免疫一次,每次免疫前及末次免疫后两周眼眶静脉窦取血,分离血清后使用ELISA方法测定其中特异性抗体效价,统计分析各组抗原诱导的体液免疫反应的差异以确定最佳免疫方案.
结果:初次免疫后,混合佐剂配伍抗原的各组小鼠血清中特异性抗体效价最高,混合佐剂(Alum&Poly I:C)+2μg gD1免疫组或混合佐剂+10μg gD1免疫组血清中特异性抗体效价分别显著高于任一单独佐剂+2μg gD1免疫组或任一单独佐剂+10μg gD1免疫组(P＜0.05),前两组小鼠血清中特异性抗体效价可分别达到后两组的8-10倍,混合佐剂配伍不同剂量的抗原组之间无显著差异(P＞0.05);第二次免疫后,混合佐剂组配伍抗原免疫小鼠血清抗体效价最高,混合佐剂+2μg gD1免疫组小鼠血清抗体效价显著高于其它佐剂+2μg gD1免疫组(P＜0.001),是后者的13-28倍,混合佐剂+2μg gD1组抗体效价显著高于混合佐剂+10μg(P＜0.05)或30μggD1组(P＜0.01),是后二者的2—4倍;第三次免疫后小鼠血清中特异性抗体效价较第二次免疫后有所降低,动物个体之间抗体效价差异大,均一性差,且佐剂与免疫剂量对抗体效价均无显著性影响(P＞0.05),混合佐剂+10μg gD1免疫组效果最佳.
结论:研究结果表明,在小鼠免疫模型中,使用Alum&Poly I:C的混合佐剂较使用任一单独佐剂可有效诱导更高水平的抗体产生,本研究中确定的gD1蛋白最佳免疫次数为两次,间隔两周,最佳免疫剂量为2μg/只小鼠.本研究为下一步HSV亚单位疫苗的临床研究奠定了实验基础.
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