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介绍了时间分辨荧光显微镜生物成像技术的原理和现状，并探讨了其在实际领域中的应用。随着具有更优异荧光性能如高量子产率、可见光激发和良好细胞通透性等的长寿命稀土荧光标记物被开发出来，同时时间分辨荧光测定技术可简单消除样品中共存杂质的背景荧光干扰，预计其在复杂的易损伤活体生物样品时间分辨荧光成像测定领域具有很好的应用前景，同时对于低成本的可见光源激发时间分辨荧光生化分析仪器的研发也具有很好的参考价值。