【摘 要】
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目的:进行人小梁细胞培养传代并建立体外高压模型.方法:人小梁细胞的培养传代:人小梁细胞经过复苏后按1:3-1:5进行传代培养,取接近80％融合的传代细胞,按1ml/管分装于己作好标记的冻存管中,冻存管逐步置于4℃、-20℃和-80℃冰箱中过夜,最后放入液氮中长期保存;体外高压模型的建立:取接近融合的传5代细胞,用注射器注入无菌空气加压,压力保持在60mmHg,加压24h后用0.25％胰蛋白酶消化细
【机 构】
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湖南中医药大学第一附属医院眼科学重点学科,长沙 410007;暨南大学医学院,广州 510632
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目的:进行人小梁细胞培养传代并建立体外高压模型.
方法:人小梁细胞的培养传代:人小梁细胞经过复苏后按1:3-1:5进行传代培养,取接近80％融合的传代细胞,按1ml/管分装于己作好标记的冻存管中,冻存管逐步置于4℃、-20℃和-80℃冰箱中过夜,最后放入液氮中长期保存;体外高压模型的建立:取接近融合的传5代细胞,用注射器注入无菌空气加压,压力保持在60mmHg,加压24h后用0.25％胰蛋白酶消化细胞,固定、脱水、包埋、切片、双染后行透射电子显微镜观察细胞超微结构并摄片.
结果:人眼小梁细胞3-5代的细胞形态十分稳定,细胞扁平宽大,胞浆清亮,胞突较宽,随着传代次数的增多,细胞形态逐渐发生明显的变化,由扁平状变成细长梭形,极似成纤维细胞.经过体外高压处理后,部分细胞超微结构轻微改变,表面微绒毛消失,线粒体空泡样变,核膜明显皱缩,部分细胞胞内脂滴及空泡增多,线粒体轻度肿胀,严重者细胞线粒体嵴肿胀,排列紊乱,粗面内质网扩张成泡状.
结论:人小梁细胞的传代细胞培养法是一种有效的体外培养方法,并且能够缩短实验周期;通过气体加压的方式能够有效地建立体外高压模型.
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