【摘 要】
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为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达.结果表明：PAMAM-D与DNA使用量分别为2 μL、0.5 μg (P＜0.05)时为最适比例；孵育时间为90和120 min时,阳性率显著高于30 min组(19.94％,18.57％
【机 构】
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上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106;上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室,上海201106;四川农业大学生命科学与理学院,雅安625014
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
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为优化猪精子介导的基因转移(SMGT)技术,提高转基因效率,本试验利用纳米化聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM-D)为载体介导猪精子转染外源DNA,经原位杂交检测其阳性率,体外受精(IVF)分析外源基因的表达.结果表明：PAMAM-D与DNA使用量分别为2 μL、0.5 μg (P＜0.05)时为最适比例；孵育时间为90和120 min时,阳性率显著高于30 min组(19.94％,18.57％vs 13.50％； P＜0.05)；以此条件处理精子,阳性率显著高于无载体和脂质体处理组(23.93％ vs 7.25％,13.25％；P＜0.05).各处理精子经体外受精后,PAMAM-D组EGFP表达率显著高于其他两组(9.19％ vs 4.81％,3.43％； P＜0.05),各组绿色荧光胚胎经基因组PCR分析均能检测到EGFP基因.以上结果说明：PAMAM-D可有效介导猪精子转染外源DNA,并通过体外受精将外源基因导入胚胎中.
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