【摘 要】
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目的：通过对斑马鱼受精卵进行显微注射剪接吗啉环反义寡核苷酸,使其铁调素基因敲降,观察铁调素表达抑制后对斑马鱼的骨代谢的影响,探讨铁调素抑制对于骨代谢影响的机制。
【出 处】
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中华医学会第八次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议
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目的：通过对斑马鱼受精卵进行显微注射剪接吗啉环反义寡核苷酸,使其铁调素基因敲降,观察铁调素表达抑制后对斑马鱼的骨代谢的影响,探讨铁调素抑制对于骨代谢影响的机制。方法：以受精后半小时斑马鱼的受精卵为模型,予以不同浓度的剪接吗啉环反义寡核苷酸的显微注射受精卵,将注射后的幼鱼于第四天进行提取RNA,反转录成cDNA,进行鉴定后得到适当浓度。在浓度为25ppm的剪接吗啉环反义寡核苷酸注射的条件下,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第四天进行铁染色,与野生型比较观察铁含量变化,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第九天分别进行茜素红和阿可辛蓝染色,与野生型比较硬骨和软骨的形态差异；对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第四天提取的cDNA采用实时定量QPCR方法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和野生型基因组的成骨下游基因的差异。对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第四天的斑马鱼予以成骨代表性的两个基因runx2a和sp7进行原位杂交,比较野生型的幼鱼相关成骨基因表达的部位的差异和信号的强弱。
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