论文部分内容阅读
目的HMGCoA还原酶是调节细胞内胆固醇合成的重要限速酶,也是他汀类降脂药物的作用靶点。我们过去的研究表明炎症应激在细胞内胆固醇稳态失衡中扮演了重要角色。本研究旨在观察炎症应激是否可以通过干扰HMGCoA还原酶介导的胆固醇合成而造成他汀类药物抵抗,并探讨其机制。材料与方法用白细胞介素1β(IL-1β)分别刺激人肝肿瘤细胞(HepG2)和人肾系膜细胞(HMCs),模拟炎症应激状态;用酪蛋白皮下注射ApoE/清道夫受体A/CD36三敲小鼠制备小鼠炎症模型。用酶学方法分别检测细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的水平;提取细胞总RNA,应用Real-time定量PCR技术检测HMGCoA还原酶mRNA水平;应用Western Blot技术检测HMGcoA还原酶蛋白表达水平;用薄层层析技术测定HMGcoA还原酶活性。用14C标记的acetate孵育HepG2或HMCs1小时后收集细胞提取胞内胆固醇,用液闪仪检测胞内胆固醇的合成量。结果细胞实验发现,当加载低密度脂蛋白(LDL)时,细胞内胆固醇水平有明显升高,同时可以反馈抑制细胞的HMGCoA还原酶mRNA、蛋白表达以及酶活性水平和胆固醇内源性合成。然而当有炎症因子IL-1β存在时,上述LDL反馈抑制细胞HMGCoA还原酶的作用全部减弱,提示炎症应激可以干扰HMGCoA还原酶的反馈调节。30μM和8μM浓度的美伐他汀分别可以抑制HepG2细胞和HMCs细胞HMGcoA还原酶50%的活性,然而,当有IL-1β存在时,同样浓度的美伐他汀仅能抑制HepG2细胞28%和HMCs细胞30%的HMGcoA还原酶活性。小鼠模型实验发现,阿托伐他汀2mg/Kg/日的用药剂量,可以明显降低小鼠血清胆固醇水平及肾脏脂质积聚,然而,有炎症应激存在时,需要将阿托伐他汀的用药剂量增加至10mg/kg/日,才能达到无炎症应激存在的小鼠模型相似的降脂效果。结论炎症应激可以通过干扰HMGCoA还原酶介导的胆固醇合成而造成他汀类药物抵抗。在有炎症应激存在下,需要增加他汀类药物的剂量才能达到相似的降脂生物学效果。此外,三敲小鼠实验结果提示炎症可以通过LDL受体途径促进动脉粥样硬化的发生。