【摘 要】
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本研究在实验室前期研究的基础上,选取4个有效抑制猪瘟病毒增殖的干扰基因N1、N2、S10和S11,其中N1和N2针对Npro基因,S10针对NS3基因,S11针对NS4A基因,进行逆转录病毒栽体介导的抑制猪瘟病毒增殖的研究.首先包装出重组逆转录病毒,感染PK-15细胞获得稳定表达干扰基因的细胞克隆,然后采用间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒滴度三种方法测定了细胞表达的shRNA抑制猪瘟病毒增殖水平
【机 构】
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军事医学科学院 军事兽医研究所 长春 130062
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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本研究在实验室前期研究的基础上,选取4个有效抑制猪瘟病毒增殖的干扰基因N1、N2、S10和S11,其中N1和N2针对Npro基因,S10针对NS3基因,S11针对NS4A基因,进行逆转录病毒栽体介导的抑制猪瘟病毒增殖的研究.首先包装出重组逆转录病毒,感染PK-15细胞获得稳定表达干扰基因的细胞克隆,然后采用间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒滴度三种方法测定了细胞表达的shRNA抑制猪瘟病毒增殖水平.结果:成功包装出携带干扰基因的重组逆转录病毒,并筛选获得稳定表达干扰基因的PK-15细胞克隆,间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒滴度三种方法测定结果表明接毒后12-60h,与对照细胞相比,荧光比例、病毒基因组的拷贝数和病毒滴度保持较低的水平,比对照细胞低1-2个数量级,48h病毒基因拷贝数抑制倍数分别为149.3,病毒感染滴度抑制倍数分别为143.54.随着时间的延长,抑制作用降低,但是仍有一定的抑制作用.
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应用PCR方法对从山东省不同地区采集的253份猪传染性胸膜肺炎肺脏和125份临床健康猪肺脏进行PCV-2和PRRSV的检测.结果,在传染性胸膜肺炎肺脏中,171份为PCV-2阳性,阳性率达67.5％;101份样品为PRRSV阳性,阳性率达40％;其中,68份样品同时检出PCV和PRRSV,共感染的阳性率达26.8％.而临床健康猪肺组织中,21份样品PCV-2检测结果为阳性,阳性率为16.8％;12
构建了表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白的重组DNA质粒pcDNA3.1(+)-orf2,并在哺乳动物表达系统COS7细胞中进行了瞬时表达,RT-PCR和间接免疫荧光均证明了所构建的重组质粒能够正确表达PCV2衣壳蛋白.用重组质粒pcDNA3.1(+)-orf经肌肉注射途径免疫Balb/c小鼠,结果表明,首免疫后7d,免疫小鼠血清中即可检测到特异性抗体,阳性率为40％(4/10),三免后14d
采用PCR方法对采自广西各地二十年(1986～2006)来,63个猪场(养殖户)的490份疑似猪瘟病料,进行CSFV、PRRSV、PCV、附红细胞体、细菌等病原的检测.结果发现广西猪瘟主要发生在中小猪场,呈混合感染;断奶仔猪多发,且多与免疫抑制病混合感染,严重干扰猪瘟疫苗的免疫效果.通过30个CSFV流行株E2基因的扩增和序列比较分析,发现广西CSFV流行株为基因Ⅰ、Ⅱ群,未发现基因Ⅲ群,其中基因
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),是2000年才发明的一种新的核酸扩增方法,具有灵敏度高、特异性强、成本低等特点,适合基层、养殖户及进出口检疫等对病原基因的快速诊断。短短几年,LAMP技术已成功地应用于SAILS、流感、乙肝等疾病的检测中.猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classi
用氯仿对苦楝皮进行抽提,提取物分离后得到四个化合物,鉴定为:川楝素(Tcooscndanin).12去乙酰基三唇素(12-Deacetyltrichilin).苦楝萜酸甲酯(metlthy kulonate)β-谷甾醇(β-Sitosterol).它们在苦楝皮氯仿提取物中的含量分别为4.86％,1.42％,1％和0.21％.实验证明其有效杀虫成分为苦楝素,采用体外培养方法研究苦楝皮的粗提物和各单一
实验以人工诱导的耐药菌株和临床分离的猪源耐药大肠杆菌Fj307为主要材料,以大肠杆菌AcrAB-TolC外排系统中AcrA蛋白为干扰目标设计RNAi实验,从表观水平检测了特异性siRNA对耐药菌YD02的抑制能力:结果显示,siRNA_164实验组使耐药菌吸光度降低到对照的1/4,差异极显著,说明siRNA_164能够造成大肠杆菌耐药性的逆转.实验使用了4个针对TolC蛋白设计合成的吲哚类外排泵抑
应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法和细菌分离鉴定,对湖南省9个市33个猪场的631份血清样品和126份病死猪内脏组织样品进行猪 2型链球菌血清学调查和细菌分离鉴定,结果血清中猪2型链球菌的抗体阳性率为48.0％,所调查的9个市均有不同程度的阳性,84.8％的猪场检出阳性抗体,不同日龄猪群阳性率分别为:种猪65.2％,肥猪51.3％、中猪39.8％、小猪25.2％,健康猪群与发病猪群抗体阳性率分
2007年4月,龙岩市某存栏母猪达200头的规模化猪场,保育栏仔猪出现体温升高,呼吸困难,咳嗽,耳、鼻端、四肢及下腹部皮肤发紫.经临床剖检及病理观察大体判断为圆环病毒与蓝耳病混合感染,为进一步确诊,进行了实验室诊断.分别设计了PCV2及PRRSV的扩增引物,结果从病例中扩增出相应的产物.通过临床、病理及实验室检测,确诊为蓝耳病与圆环病毒混合感染.
通过流行病学调查、临床症状,病理剖检,结合对可能发生的疫病的实验室检测,初步确诊这个猪场发生疫病流行是由猪瘟病毒和猪附红细胞体病混合感染造成的.通过采取一系列综合防治措施,猪场疫情得到有效控制.
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