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目的 构建不同配制方案的人脐带间充质干细胞/Ⅰ型胶原(hUMSCs/Collagen type Ⅰ)复合体,向类软骨细胞方向诱导分化,并通过正交实验筛选复合体的最佳配制方案.方法 通过流式细胞技术及定向诱导分化的方法鉴定hUMSCs；参考相关文献及预实验结果,选取hUMSCs接种密度与Collagen type Ⅰ浓度的实验水平为：7.5× 105/ml、22.5× 105/ml、67.5× 105/ml与1.5mg/ml、2.5mg/ml、3.5mg/ml；通过二因素三水平完全实验设计,配制9种不同组合的hUMSCs/Collagen type Ⅰ复合体,加软骨细胞诱导液培养,每日在显微镜下观察,1周后行蛋白多糖及Ⅱ型胶原蛋白免疫组化；设计三因素三水平正交实验表,依据实验方案配制不同组合的hUMSCs/Collagen type Ⅰ复合体,加软骨细胞诱导液培养,在第1、2、3周末利用CCK-8试剂盒与蛋白聚糖Elisa试剂盒依次检测细胞增殖数量与蛋白多糖的分泌量.结果 免疫组化结果观察复合体中的细胞呈长梭形、均匀分布,胞质内可见浅棕染色物质与蓝染的细胞核,胶原支架有降解；2.5mg/ml Collagen type Ⅰ制备的复合体具有较合适的胶凝时间(3-5分钟)及一定的立体塑形强度；hUMSCs接种密度是细胞增殖数量的显著影响因素(P＜0.05),7.5×105/ml/1.5mg/ml组合中细胞数最少,7.5×105/ml/2.5mg/ml组合次之,67.5× 105/ml/3.5mg/ml组合最多；hUMSCs与Collagen type Ⅰ的交互作用是蛋白多糖含量的主要显著影响因素(P＜0.01),7.5×105/ml/1.5mg/ml组合中的蛋白多糖含量最多,7.5× 105/ml/2.5mg/ml组合次之,22.5× 105/ml/3.5mg/ml组合最少；hUMSCs接种密度是细胞分泌活力的主要显著影响因素(P＜0.01)； 7.5×105/ml/1.5mg/ml组合中的细胞分泌活力最好,7.5× 105/ml/2.5mg/ml次之,67.5×105/ml/3.5mg/ml最差.复合体中细胞增殖数与蛋白多糖含量有随时间下降趋势,而细胞分泌活力有先降后升趋势.结论 hUMSCs/Collagen type Ⅰ复合体中细胞正常存活并向类软骨方向分化,提示体外构建这种组织工程髓核可行；仅从细胞功能考虑,认为7.5×105/ml/1.5mg/ml组合为最佳方案,具有蛋白多糖含量高、细胞分泌活力好、节省细胞的优势；综合考虑可操作性及力学性能,认为7.5×105/ml/1.5mg/ml组合方案更优越.