【摘 要】
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根据报道的苹果褪绿叶斑病毒(Apple Chlorotic Leaf Spot Virus, ACLSV)外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计合成引物,利用RT-PCR方法克隆了ACLSV北京分离物
【机 构】
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中国农业大学植物病理学系,农业部植物病理学重点实验室,北京100193
【出 处】
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中国植物病理学会2010年学术年会
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根据报道的苹果褪绿叶斑病毒(Apple Chlorotic Leaf Spot Virus, ACLSV)外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的核苷酸序列设计合成引物,利用RT-PCR方法克隆了ACLSV北京分离物的CP基因(ACLSVcpbj),该基因由582个核苷酸组成,与GenBank中报道的ACLSV的CP核苷酸相似性最高为95％,最低为87％.随后将ACLSV的CP基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-ACLSVcp.SDS-PAGE电泳分析发现,经IPTG诱导,预期的有6个组氨酸标签的28 kDa的融合蛋白在大肠杆菌中得到大量表达.利用切胶回收的方法纯化原核表达的目的蛋白,并以此蛋白为抗原获得了抗血清.间接ELISA检测显示此抗血清效价为1∶8192.Western blot分析结果显示该抗血清可以与表达的融合蛋白以及发病苹果蛋白发生特异性反应,表明抗该抗血清具有高度特异性,可用于ACLSV的血清学检测.
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