【摘 要】
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为研究更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗候选株,本试验在野毒株C78-1和单缺失株△crpC78-1的基础上,运用自杀性质粒介导的等位交换技术敲除cya基因,
【机 构】
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河南省动物疫病与公共安全院士工作站,河南,洛阳,471003
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会
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为研究更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗候选株,本试验在野毒株C78-1和单缺失株△crpC78-1的基础上,运用自杀性质粒介导的等位交换技术敲除cya基因,分别构建了单缺失株△cyaC78-1和双缺失株△crp△cyaC78-1,并将二者的生物学特性与疫苗株C500和单缺失株△crpC78-1进行对比.首先构建含缺失1182bpcya基因的重组自杀性质粒PREcya,再与C78-1和△crpC78-1分别进行接合转移,通过两步法筛选减毒猪霍乱沙门菌单缺失株△cyaC78-1和双缺失株△crp△cyaC78-1.PCR及测序结果表明△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1构建成功.进一步的生物学特性检测结果表明,所构建的△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1的血清型与△crpC78-1保持一致,并能够稳定遗传缺失后的cya基因.二者的生化特性与△crpC78-1基本相同.△cyaC78-1的生长速度较△crpC78-1相差不大,但△crp△cyaC78-1的生长速度较△crpC78-1明显减慢.经小鼠的毒力试验表明,△cyaC78-1的毒力与△crpC78-1相当,但△crp△cyaC78-1的毒力较△crpC78-1下降约516倍,较疫苗菌株C500下降约1531倍.试验结果表明,构建的△crp △cyaC78-1双缺失株毒力降低,遗传稳定,背景清晰,可以作为针对猪沙门菌病的减毒活疫苗候选株.
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