白念珠菌烯醇化酶的分离及纯化

来源 :第四届海峡两岸菌物学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kr1983
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为分离及纯化白含珠菌烯醇化酶(Enolase),并测定其体外活力,根据白念珠的烯醇化酶的生化特点,以酶解法(lyticase)破白念珠菌细胞壁,获全菌蛋白,然后采用50℅和75℅梯度硫酸铵沉淀法和ConA-Sepharose 4B凝胶柱及DEAD-Sephadex G-5凝胶柱等柱层板法从菌体蛋白中分离纯化烯醇化酶,在还原态进行十二烷基磺酸钠-丙烯酰胺凝脉电泳(SDS-PAGE),所测定的分子量为47KD,从15.5g的白念珠菌孢子(湿重)中得500mg的菌体蛋白,又从500mg菌体蛋白中大约分离出3.7mg的酶,在体外模拟糖代谢反应链测定酶白的活力,根据反应链中单位时间NADH转变为NAD的量,推算出所分离的白念珠菌烯醇化酶的活力大约为20U/mg。
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