【摘 要】
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目的：构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及研究干扰载体在43℃热激条件下启动表达情况。方法：以Hsp/miR-HSP70-2载体为
【机 构】
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华中科技大学同济医学院计划生育研究所
【出 处】
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中华医学会第十次全国妇产科学术会议
论文部分内容阅读
目的：构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA干扰载体以及研究干扰载体在43℃热激条件下启动表达情况。方法：以Hsp/miR-HSP70-2载体为模板PCR方法扩增Hsp70-B启动子,并进行测序验证,将成功获取的Hsp70-B启动子取代pGL3-BasicCMV启动子,依据有效的CatSper1-siRNA序列,设计合成MIR-30结构寡核苷酸序列,构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA-CatSper1干扰载体。睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的miRNA-CatSperl干扰载体转染小鼠支持细胞(TM4 )在43℃热激条件下启动表达。结果：成功构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的pGL3-Basic-Hsp70B-EGFP-MIR30-CatSperl干扰载体，实验组(靶向pGL3-Basic-Hsp70B-EGFP-MIR30-CatSper1干扰载体)、阴性对照(pGL3- Basic - Hsp70B - EGFP-MIR30-NC)、空白载体(pGL3一Basic一CMV一EGFP)分别转染TM4细胞，Hsp70B在43℃热激3min即可启动同时并不影响支持细胞的增长。结论：成功构建睾丸组织特异性诱导型热休克蛋白Hsp70-1基因(Hsp70-B)启动子控制的pGL3-Basic-Hsp70B-EGFP-MIR30- CatSperl干扰载体，在43℃热激3min下启动Hsp70一B同时不影响细胞增长。
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