【摘 要】
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糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAG)为广泛存在于动物结缔组织中的一类由氨基己糖和糖醛酸及其它们异构化或硫酸化残基以双糖单位重复构成的直链多糖.GAG糖链的长度,单糖残基和硫酸根基团的排列形式决定了糖链与各类蛋白因子结合的能力,进而影响其所在蛋白聚糖的生物学活性.其中,由于低分子量的GAG具有粘度小、溶解性好、易吸收等特点,相对于普通的GAG,有着更高的生物活性.本课题组在筛选获
【机 构】
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山东大学药学院生化与生物技术药物研究所 山东大学药学院生化与生物技术药物研究所;山东大学国家糖工程
【出 处】
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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会
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糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAG)为广泛存在于动物结缔组织中的一类由氨基己糖和糖醛酸及其它们异构化或硫酸化残基以双糖单位重复构成的直链多糖.GAG糖链的长度,单糖残基和硫酸根基团的排列形式决定了糖链与各类蛋白因子结合的能力,进而影响其所在蛋白聚糖的生物学活性.其中,由于低分子量的GAG具有粘度小、溶解性好、易吸收等特点,相对于普通的GAG,有着更高的生物活性.本课题组在筛选获得一株产糖胺聚糖水解酶的Arthrobacter sp.菌株的基础上,利用简并引物,反式PCR等方法克隆得到编码该水解酶基因的开放阅读框架,基因序列比对及大肠杆菌重组蛋白底物适应性分析皆证明该酶为硫酸软骨素水解酶AC外切酶(chondroitin AC lyase,EC4.2.2.5).进而对大肠杆菌重组表达及纯化获得重组酶进行了系统的底物特异性和催化模型研究研究,结果表明该酶可以有效的水解HA和各类硫酸软骨素,其降解产物为含有不饱和双键的二糖；而,硫酸皮肤素,肝素骨架与肝素不是该酶的有效底物.此外,利用化学酶法合成的肝素/软骨素"混合"模式底物,确定了该酶外切酶的催化方向.
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