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目的:建立反相高效液相色谱法测定人血浆中咪达唑仑浓度的方法。方法:采用Hypersil-C18反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，水(pH=7.3，内含三乙胺0.15[％]，磷酸0.05[％])-乙腈(46:54)为流动相;流速为1.0mL·min-1;柱温为30℃;样品经碱化提取分离后用流动相溶解;采用紫外检测，检测波长为223nm。结果:本方法测定咪达唑仑血药浓度在50～2000ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9996)，咪达唑仑的保留时间为9.60min，其低、中、高(200、500、2000ng·mL-1)浓度的提取回收率分别为92.11[％]、90.25[％]、93.27[％]，方法回收率分别为96.81[％]、101.97[％]、101.58[％]，日内、日间RSD均<5.0[％]。咪达唑仑血浆样品预处理室温放置10h及咪达唑仑标准贮备液于4℃下15d稳定。结论:本法简单，准确，快速，稳定，灵敏度高，可满足咪达唑仑血药浓度的检测及临床药代动力学研究要求。