【摘 要】
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目的：比较五种不同方法提取全血RNA结果,改进全血RNA提取方法,以提高临床基因检测过程中提取的RNA质量.方法：收集5份抗凝血标本,各取1ml外周全血,分别采用五种方法提取外周血总RNA：先用淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞和三种溶血素(BD溶血素、Tris-NH4Cl以及NH4Cl)裂解红细胞后再用Trizol提取RNA以及采用血液RNA提取试剂盒提取RNA,最后将提取的RNA溶于50μl无
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院检验科
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目的：比较五种不同方法提取全血RNA结果,改进全血RNA提取方法,以提高临床基因检测过程中提取的RNA质量.方法：收集5份抗凝血标本,各取1ml外周全血,分别采用五种方法提取外周血总RNA：先用淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞和三种溶血素(BD溶血素、Tris-NH4Cl以及NH4Cl)裂解红细胞后再用Trizol提取RNA以及采用血液RNA提取试剂盒提取RNA,最后将提取的RNA溶于50μl无RNase水中,通过比较提取的RNA浓度、纯度以及电泳验证其完整性,评估几种方法提取的RNA质量.结果：采用淋巴细胞分离液(P)、BD溶血素(B)、Tris-NH4Cl(T)、NH4Cl(N)以及试剂盒(K)提取的RNA浓度分别为(37.8±17.8)、(29.81±31.44)、(264.07±63.72)、(228.54±51.98)和(62.25±7.89)ng/μL,其中Tris-NH4Cl和NH4Cl组提取的RNA浓度明显高于其它组,差异具有统计学意义(T vs.P：P=0.0079；N vs.P：P=0.0079；Tvs.B：P=0.0079；T vs.B：P=0.0079；Nvs.B：P=0.0079；Tvs.K：P=0.0079；N vs.K：P=0.0079),而Tris-NH4Cl和NH4Cl组之间结果无统计学意义(P＞0.05).RNA纯度(A260/280)分别为(1.82±0.04)、(1.77±0.07)、(1.82±0.01)、(1.83±0.01)和(2.12±0.02),其中P、T和N方法提取的RNA纯度较好.电泳结果显示,五组RNA完整性无明显差异.结论：五种方法中,采用Tris-NH4Cl以及NH4Cl裂解红细胞后提取RNA,RNA浓度较高,操作简单且价格便宜.
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