草鱼PepT1基因的表达与抗体制备

来源 :中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:daiguangying
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  为在蛋白水平上研究草鱼小肽转运载体1(Oligopeptide transporter 1,PepT1)转运寡肽的作用机制,本实验利用实验室已获得的草鱼PepT1基因全长,进行序列及免疫原性分析,选择长度为107个氨基酸(474 ~581)的多肽作为目的片段,扩增该片段,并引入双酶切位点EcoRⅠ和HindⅢ后,链接至pET32a(+)上,构建表达载体pET32a(+)-PepT1,转化至BL21中,获得重组基因工程菌,通过IPTG诱导表达,获得目标多肽,并以此为抗原,制备PepT1特异性抗体.SDS-PAGE电泳分析表明,目标多肽分子量约为30kDa.采取耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰大耳兔,初次免疫一次,加强免疫3次,总时长为37天.制备了草鱼PepT1抗体,ELISA测得效价为1∶4×105;免疫组化结果表明,抗体具有较高亲和力和特异性,可以应用与草鱼PepT1的表达定位研究.该抗体的获得,为草鱼PepT1表达及转运活性的系统研究奠定了基础,同时获取的PepT1抗体,亦可用于其他鱼类PepT1转运蛋白表达定位和定量研究.
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