【摘 要】
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目的：药用植物虎眼万年青(Ornithogalum caudatum)中鲨烯合酶(Squalene synthase,SQS)是甾体皂苷生物合成中第一步关键酶,催化两分子法尼基焦磷酸(FPP)形成鲨烯(Squalene)
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/卫生部天然药物生物合成重点实验室,北京 100050
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目的：药用植物虎眼万年青(Ornithogalum caudatum)中鲨烯合酶(Squalene synthase,SQS)是甾体皂苷生物合成中第一步关键酶,催化两分子法尼基焦磷酸(FPP)形成鲨烯(Squalene).拟通过转录组测序对虎眼万年青SQS基因发掘,合成cDNA,原核表达和功能鉴定；方法：从RNA-Taq数据库中得到两个与SQS基因高度同源的unigenes.通过巣式PCR从O.caudatum 中得到了开放阅读框1230bp编码409aa的OcSQS1全长序列.为得到其可溶性表达,采用了三种策略：诱导条件进行优化,构建不同类型带有融合标签、分泌肽、分子伴侣的表达载体以及对OcSQS1的截短突变.结果：通过OcSQS1的截短突变得到了能够进行可溶性表达的蛋白,并具有催化两分子FPP转化形成鲨烯体外催化功能.结论：首次通过实验验证了二次跨膜结构域对OcSQS1的正确折叠起到重要作用,为真核基因异源表达提供依据.
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