【摘 要】
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将随机八肽通过主要衣壳蛋白pⅧ展示于丝状噬菌体fd-tet表面,从而获得f8/8风景噬菌体文库.因其具有许多优良特性,如多肽展示效价高、稳定性好、结构高度均一等,是靶向配
【机 构】
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中国科学院青岛生物能源与过程研究所生物传感技术团队,青岛市松岭路189号,26610
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将随机八肽通过主要衣壳蛋白pⅧ展示于丝状噬菌体fd-tet表面,从而获得f8/8风景噬菌体文库.因其具有许多优良特性,如多肽展示效价高、稳定性好、结构高度均一等,是靶向配体筛选的理想材料.在本报告中将汇报本课题组基于f8/8风景噬菌体文库高通量筛选特异性噬菌体探针用于生物分析和生物传.针对游离前列腺抗原(fPSA),筛选获得了风景噬菌体单克隆.随后,亲和性和特异性好的噬菌体单克隆作为捕获探针,联合针对PSA的单克隆抗体,首次提出了基于噬菌体的酶联免疫吸附法(ELISA).与免疫吸附实验相比,该策略具有简单、廉价、高效等优势.另外,以产自T.reesei菌株QM9414纤维素酶系的内切葡聚糖酶Ⅱ(EG I)为模型,采用噬菌体展示技术,从f8/8风景噬菌体文库中,成功筛选获得了特异性结合EG I的八肽配体,其氨基酸序列为EGSDPRMV.以八肽配体EGSDPRMV为模式,借助对称载体Ff噬菌体,直接固定风景噬菌体EGSDPRMV,构筑多肽芯片.结果表明,噬菌体EGSDPRMV介导的多肽芯片,其产生的荧光信号重现性更好,荧光强度更高,灵敏度更好,这主要是由于每一斑点中所固定多肽的浓度得到了明显提高.此外,该固定策略还不受多肽配体组成的影响,并且固定的多肽配体拥有自由的氨基端.因此,风景噬菌体文库技术有望在生物分析领域中高效、廉价的的生物分子探针制备中发挥重要作用.
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