【摘 要】
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前期研究证明黄瓜果实中的CsWRKY30基因在农药霜霉威胁迫下呈现明显地上调表达,对该基因的分离和功能鉴定将有助于揭示其在黄瓜果实霜霉威降解过程中的作用机制,为减少农药残
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31272158);黑龙江省自然科学基金项目(QC2012C122)
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前期研究证明黄瓜果实中的CsWRKY30基因在农药霜霉威胁迫下呈现明显地上调表达,对该基因的分离和功能鉴定将有助于揭示其在黄瓜果实霜霉威降解过程中的作用机制,为减少农药残留提供参考。以低农药残留黄瓜品系‘D0351’和高农药残留品系‘D9320’为试验材料,采用RT-PCR技术克隆得到CsWRKY30基因,并利用生物信息学方法进行分析,预测其结构和功能;应用Real time-PCR技术分析该基因的表达情况;构建黄瓜真核过量表达载体重组质粒pBI121-CsWRKY30和绿色荧光表达载体pCAMBIA1302-CsWRKY30-GFP。CsWRKY30全长1 014 bp,编码337个氨基酸。生物信息学分析表明,理论分子量为83.695 kD,等电点为5.09,平均亲水系数是0.814,推测CsWRKY30为亲水性蛋白质。CsWRKY30具有高度保守的WRKY基因家族结构域,亚细胞定位预测为细胞核,推测是在细胞核内发挥主效作用的转录因子。在400倍霜霉威处理条件下,CsWRKY30在两个黄瓜品种中的表达模式不同,在‘D0351’中的表达水平极显著高于对照,约为对照的6.13倍;在‘D9320’中的表达水平与对照并无差异。CsWRKY30基因在黄瓜不同部位的表达量为果>叶>茎。对农药处理后不同时间点的‘D0351’果实中该基因的表达水平进行了分析,农药胁迫后0.5、1、3、6、9h,CsWRKY30表达量上调,而12、24、48 h与对照没有差别。以上结果表明CsWRKY30响应霜霉威信号的转导,并在胁迫初期发挥作用。构建了黄瓜过量真核表达载体重组质粒pBI121-CsWRKY30,为进一步研究CsWRKY30在黄瓜果实霜霉威降解过程中的作用机制奠定了基础。
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