【摘 要】
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在本课题中，我们尝试在甲醇酵母一毕赤酵母中进行无标记基因修饰的方法，其中以大肠杆菌的毒蛋白MazF作为反向筛选标记。mazF是在AOXl启动子的严紧控制之下，它在毕赤酵母中的
【机 构】
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华东理工大学生物工程学院国家重点工程实验室上海200237
【出 处】
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2012工业生物过程优化与控制研讨会
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在本课题中，我们尝试在甲醇酵母一毕赤酵母中进行无标记基因修饰的方法，其中以大肠杆菌的毒蛋白MazF作为反向筛选标记。mazF是在AOXl启动子的严紧控制之下，它在毕赤酵母中的诱导表达会抑制细胞的生长。在构建的质粒中，mazF基因和Zeocin抗性基因分别作为反向和正向筛选标记，并且，mazF-ZeoR单元两侧有两个正向重复序列，用于标记回收。从模式质粒构建而成的线性化质粒通过同源重组，整合到毕赤酵母的基因组中，实现基因改造。由于反向筛选是在诱导AOXl的甲醇培养基中进行，通过两侧正向重复序列间的同源重组，此标记可以得到有效的回收，此操作不会引入非必要的筛选标记。这种新的方法使得此筛选标记基因可以重复使用，从而完成多种基因修饰，这种方法成为毕赤酵母研究中十分有用的工具。
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