【摘 要】
：
溶菌酶是无脊椎动物在先天免疫反应中对抗细菌感染的关键蛋白.本研究通过RT-PCR获得斑点叉尾鮰C型溶菌酶的全长cDNA381bp序列,含保守残基Glu50和Asp67以及8个保守的半胱氨酸残基.将此cDNA片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体,转化至毕赤酵母X-33中,通过不同浓度博来霉素筛选高拷贝转化子.经0.5％甲醇诱导,在pH 6.0和29℃下表达120小时,表达量最高.利用Ni
【机 构】
：
上海海洋大学 食品学院,上海201306
论文部分内容阅读
溶菌酶是无脊椎动物在先天免疫反应中对抗细菌感染的关键蛋白.本研究通过RT-PCR获得斑点叉尾鮰C型溶菌酶的全长cDNA381bp序列,含保守残基Glu50和Asp67以及8个保守的半胱氨酸残基.将此cDNA片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体,转化至毕赤酵母X-33中,通过不同浓度博来霉素筛选高拷贝转化子.经0.5％甲醇诱导,在pH 6.0和29℃下表达120小时,表达量最高.利用Ni-NTA柱亲和层析得到纯化的样品.重组蛋白分子量为15kDa,western blot初步验证为目的蛋白,进一步的MALDI-TOF-TOF质谱鉴定证明,纯化得到的是重组C型溶菌酶.通过琼脂平板扩散和浊度测定法,表明该重组C型溶菌酶具有对枯草牙孢杆菌较强的抑菌活性.
其他文献
本文构建了迟钝爱德华氏菌外膜蛋白重组表达载体并表达纯化获得了分子量约52kDa 的高纯度蛋白.将100 尾健康日本鳗鲡均分为2 组,分别腹腔注射牛血清白蛋白(BSA,1mg/mL)和迟钝爱德华氏菌外膜蛋白(OmpA,1mg/mL)0.2mL/尾.于免疫后7 d,14 d 和28 d 采集鳗鲡血液、粘液、肝脏和肾脏,测定各时间点的补体活性、溶菌酶含量、全血细胞转化水平和血清抗体效价等免疫指标.结果表
本实验室2012～2014 年对我国养殖和野生三疣梭子蟹的微孢子虫感染状况进行了广泛的流行病学调查，发现我国养殖和野生三疣梭子蟹感染的微孢子虫在分子水平(SSU rRNA)上属于同一个种(Ameson sp.).微孢子虫孢子具有坚硬的几丁质外壳，对分子检测的效率产生较大影响，为此，本研究根据调查获得的我国三疣梭子蟹微孢子虫流行种的分子序列设计了两对特异的套式引物(MI1F/MI545R 和MI23
东北七鳃鳗(Lampetra morii)是现存最古老的无颌类脊椎动物之一,分布于我国辽河流域、鸭绿江、黑龙江省东部山区河流,对其免疫系统的研究在理论上有着重要的进化意义.白细胞介素-8(Interleukin 8,IL-8)是一种趋化性细胞因子,研究发现IL-8 能促进炎性反应进程、刺激血管的发生、促有丝分裂、调节宿主免疫功能等.本研究通过生物信息学方法对肝脏cDNA 文库中的序列进行查找与分析
coat-ε蛋白是组成COPⅠ的coatmer 复合体的一个亚基,采用cDNA 末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA end,RACE)技术,经DNAMAN 比对拼接得出coat-ε基因全长1402bp,5非编码区(UTR)84bp,3非编码区(UTR)310bp,开放阅读框1008bp,预测编码335 个氨基酸,SignalP3.0 Server 和 TMHMM
选择不同生长时期的乌龟(♀)×黑颈乌龟(♂)杂交F1 代共360 只，测定了体质量、背甲长、背甲宽、壳高、腹甲长等17 个形态性状，采用相关分析、通径分析和多元回归分析研究了形态性状对体质量的影响效果.结果表明，除个别性状外，所测量形态性状与体质量的相关系数均达到极显著水平(P<0.01)；通径分析显示背甲长、背甲宽、壳高、腹甲长、腹甲后半部长和甲桥长对体质量的通经系数达到显著水平，它们是直接影响
本文基于酶的纯化鉴定、动力学分析、序列比对和结构预测，对南极磷虾胰蛋白酶的结构及适冷性进行研究，通过与其他几种适冷、中温胰蛋白酶进行差异性分析，探讨南极磷虾胰蛋白酶等适冷酶在催化反应过程中应对低温环境的机制。结果显示适冷胰蛋白酶和中温胰蛋白酶的催化中心严格保守，遵循一致的催化机制；但南极磷虾胰蛋白酶等适冷酶为了适应低温环境，各级结构都表现出一定的应对机制：疏水性残基含量偏高、带正负电荷残基含量偏低
在光照培养箱中研究了光照强度(150,220,290,360 和430 μmol·m-2·S-1)对微绿球藻(Nannochloropsis oculata)SHOU-S14 的生长、油脂积累及油脂特性的影响.结果表明：经过10d 培养,光照强度为150 μmol·m-2·S-1 组微绿球藻生长最好,细胞浓度(7.0×107 cells·mL-1)和生物量(0.54±0.04g·L-1)显著高于其
本研究探讨了海洋硬骨鱼三斑海马的脂溶性组分的抗炎活性.系统溶剂萃取海马粗粉95％乙醇回流提取物得到石油醚提取物,经硅胶柱层析,获得组分FrⅣ,经硅胶柱层析用不同溶剂洗脱分别获得中性脂,糖脂和磷脂组分,基本组分通过薄层层析和红外光谱分析.通过检测体外脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 炎症的促炎细胞因子分泌分析脂质的抗炎作用.结果表明三斑海马脂质与脂多糖刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7
鱼类性别一直是科学家研究的重点,因为研究鱼类性别不仅具有很大的科研价值,而且具有重要的实践意义。大黄鱼主要分布于东部沿海地区,是中国海水网箱养殖量最大的重要经济物种,其生长具有雌雄二态性,雌性个体比雄性个体长得更快。但是目前关于大黄鱼性别分化的研究却很少。在该研究中,利用RNA-Seq 技术分析正在发育中的大黄鱼雌雄性腺的基因表达谱。我们以大黄鱼综合转录组作为参考,将测序共产生的40G 的读长映射
[目的]为了了解巨魾鱼的种质资源情况.[方法]利用GenBank 数据库中鮡科鱼线粒体ND6 基因序列保守区设计引物,采用PCR技术克隆并测序,共得到12 条巨魾鱼ND6 基因全序列.通过DNAMAN5.0 软件比对序列,MEGA 5.0 软件分析鮡科不同鱼类的进化关系.[结果]结果表明：巨魾鱼ND6 基因序列全长为529 bp,碱基含量分别为T 25.30％、C 28.00％、A 34.40％、