【摘 要】
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根据GenBank公布的弓形虫529 bp重复序列设计特异性引物,以刚第弓形虫RH株基因组DNA为模板,常规PCR扩增出长度为212bp的特异性保守序列,将其克隆到pGEM-T Easy载体中构建重组
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏扬州225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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根据GenBank公布的弓形虫529 bp重复序列设计特异性引物,以刚第弓形虫RH株基因组DNA为模板,常规PCR扩增出长度为212bp的特异性保守序列,将其克隆到pGEM-T Easy载体中构建重组质粒标准品,以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立弓形虫荧光定量PCR的检测方法.将该方法用于临床上病死猪的弓形虫检测.结果表明:用重组质粒制作的标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,溶解曲线特异相关系数0.9997,平均试验间变异系数2.30％,能检出约0.05个速殖子；检测弓形虫YZ-1株与YZ-2株均为阳性,而检测水牛梭形肉孢子虫、犬等孢球虫、柔嫩艾美耳球虫基因组DNA均为阴性；检测24头病死猪,弓形虫阳性率为70.8％,略高于常规PCR方法的检出率(66.7％),但检测的69个组织样品中,荧光定量PCR方法的检出率(50.7％)明显高于常规PCR方法的检出率(34.8％).
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