【摘 要】
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目的 设计和构建针对Skp2特异性的siRNA腺病毒载体，观察Skp2-siRNA重组腺病毒对人大肠癌SW480细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的影响.方法 通过细菌内同源重组法，构建含有H1启动子驱动、带有绿色荧光蛋白(GFP)标志的、表达针对Skp2基因的pAd-siRNA载体，并构建相应的阴性对照病毒载体，通过测序鉴定后在AD293细胞中进行包装、扩增.体外转染人大肠癌Sw480细胞，在荧光显微
【机 构】
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湖北医药学院附属人民医院消化内科,湖北 十堰 442000 湖北医药学院附属人民医院临床医学研究所
【出 处】
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2013《中国国际肿瘤营养学论坛》暨第一届《全国肿瘤营养与支持治疗学术会议》
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目的 设计和构建针对Skp2特异性的siRNA腺病毒载体，观察Skp2-siRNA重组腺病毒对人大肠癌SW480细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的影响.方法 通过细菌内同源重组法，构建含有H1启动子驱动、带有绿色荧光蛋白(GFP)标志的、表达针对Skp2基因的pAd-siRNA载体，并构建相应的阴性对照病毒载体，通过测序鉴定后在AD293细胞中进行包装、扩增.体外转染人大肠癌Sw480细胞，在荧光显微镜观察GFP表达以确定转染效率；MTT比色法检测细胞生长抑制率，流式细胞技术检测细胞周期、细胞凋亡.结果 成功构建了针对Skp2基因的siRNA腺病毒表达载体及相应的阴性表达载体，经琼脂糖电泳和测序鉴定干扰片断的碱基序列及插入位点完全正确；Skp2基因沉默后影响大肠癌SW480细胞的周期进程，使其发生G0/G1期阻滞；抑制了细胞的增殖，使其生长速度减缓；同时促使大肠癌Sw480细胞的凋亡.结论 利用RNAi技术构建含有目的基因Skp2的腺病毒载体，当Skp2基因沉默后可影响大肠癌SW480细胞的细胞周期，发生GO/G1期阻滞，进而抑制了细胞的增殖，并使细胞的生长速度减慢、细胞凋亡增加.Skp2有望成为大肠癌基因治疗的潜在靶点.
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