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25-羟基维生素D,包括25-羟基维生素D2(25-OH VD2)和25-羟基维生素D3(25-OH VD3).是维生素D在体内的主要代谢形式之一.由于其半衰期长、存在形式稳定而被认为是维生素D营养水平的标志物.液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测维生素D具有特异性强、准确性高的特点,被认为是评价其营养状况的"黄金标准"测定法.本实验采用Cleanert(R)SLE96孔板进行血清样品前处理。实验加入样品后静置5min使样品被吸附于硅藻土微孔中，再使用2mL异辛烷分4次洗脱进行微观液液萃取，吹干复溶。整个操作配合使用Cleanert(R)M96生物样品前处理仪和Cleanert(R)V96氮气浓缩仪可同时处理96个样品，较传统液液萃取方法节约了样品处理时间、减少了溶剂的使用量。结果使用SCIEX5500QTRAP LC-MS/MS检测表明SLE技术相比PPT(Protein Precipitation Plate)和LLE(Liquid-Liquid Extraction)大大提高血清中磷脂的去除率，从而降低其对检测的基质效应影响。该实验方法具有良好的稳定性及可靠性，线性相关系数25-OH VD2和25-OH VD3均大于0.999，定量限分别为1.1ng/mL和0.16ng/mL，RSD＜13(n=5)，为临床研究提供了一种良好的解决方案。