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目的 统计分析内蒙古医科大学第三附属医院2013年7月至2013年12月临床送检微生物标本中鲍曼不动杆菌(Ab)的检出率及耐药性；建立Ab体外生物膜(BF)模型,采用扫描电镜观察生物膜形成过程,结晶紫生物膜半定量,分析其形成生物膜的能力；观察红霉素(EM)对Ab生物膜的破坏作用及联合亚胺培南后对生物膜内细菌的杀灭情况,并确定联合用药的最佳浓度,为临床用药提供实验依据.方法 (1)收集内蒙古医科大学第三附属医院2013年7月至2013年12月临床送检的微生物标本,全自动细菌分析仪鉴定为Ab,K-B纸片扩散法测定Ab药物敏感情况,刚果红平板琼脂法及阿利新蓝-刚果红染色定性Ab生物膜,选取能形成BF的Ab菌株建立其生物膜体外模型,分别在24h、48h、72h、5d结晶紫染色法生物膜半定量,扫描电镜观察Ab生物膜形态,同时琼脂平板计数法进行Ab生物膜内活菌计数,以敏感不形成BF的Ab作对照.(2)测定EM、亚胺培南对Ab的最低抑菌浓度(MIC),根据MIC值配制不同浓度药物,棋盘法联合应用EM和亚胺培南作用于成熟生物膜,作用24h后,SEM观察破坏生物膜及杀菌情况,同时琼脂平板法生物膜内细菌计数.所得数值多组间采用单因素方差分析,两组间t检验进行统计学分析.结果 (1)本课题共收集临床送检标本数4332例,检出阳性菌1031例,其中Ab检出率为14.64％,多重耐药Ab占检出Ab的43.71％,阿利新蓝-刚果红染色,Ab中形成BF占67.55％,多重耐药Ab形成生物膜在多重耐药菌中占87.88％.Ab药物敏感实验结果显示：头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南敏感率分别为：89.36％和50.81％,对左氧氟沙星、环丙沙星、美洛培南、阿米卡星、妥布霉素、头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素及哌拉西林的敏感率均在50％以下；(2)结晶紫染色Ab生物膜半定量：培养24h,细菌量增多,OD值为0.62±0.05；培养48h,Ab开始形成生物膜,但数值较小,OD值(1.33±0.07)；培养72 h,Ab形成成熟生物膜,OD值(2.85±0.14)；5dOD值(2.71±0.14)；相对应的敏感菌株四个时间段测量结果分别为(0.44±0.18)、(0.522±0.18)、(0.63±0.21)、(0.52±0.39).单因素方差分析：耐药菌株结晶紫半定量OD值在24 h、48 h、72 h差异有统计学意义(P＜0.05),72h和5d相比差异无统计学意义(P＞0.05),耐药菌株和敏感菌株相比：24h时差异无统计学差异(P＞0.05),48 h、72 h、5d差异有统计学意义(P＜0.05),扫描电镜观察：耐药Ab菌株培养72 h形成成熟生物膜,敏感菌株未见生物膜形成；(3)Ab成熟生物膜内细菌计数,三次试验(n=12)测得实验菌株BF内活菌数分别为(×103 cfu/mL)(1.98±0.17)、(1.80±0.17)、(1.96±0.10),单因素方差分析表明三次试验生物膜内活菌数差异无统计学意义(P＞0.05)；(4) E-test法测定EM对实验菌株的MIC值是256μg/mL,对敏感菌株的MIC值是2μg/mL,微量稀释法测得亚胺培南对实验菌株的MIC值是32 μg/mL,对敏感菌株的MIC值是2μg/mL；联合用药后,扫描电镜观察,清亮孔的引导片无生物膜存在,残留少量细菌,浑浊孔细菌量较多,但与用药前相比,生物膜被破坏,细菌数量减少,空白孔较72 h时生物膜增多.平板琼脂计数法生物膜内药物作用前后有统计学意义(P＜0.05).联合用药后分析在EM有效浓度大于16μg/mL,亚胺培南作用浓度大于4μg/mL时都能杀灭细菌.结论 (1)内蒙古医科大学第三附属医院Ab检出率高,分离菌株主要来自痰及创面分泌物,Ab送检科室集中在烧伤、ICU、MICU、呼吸内科病房,耐药率高,易形成生物膜,能在72 h能形成成熟生物膜；(2)EM在一定浓度范围内能破坏Ab生物膜,并能增强亚胺培南的杀菌作用.