PMAP-36及(PMAP-36)2在毕赤酵母中的表达及表达产物对肉仔鸡生长及免疫性能的影响

• 作 者: 王良;单安山;
• 机 构: 东北农业大学动物营养研究所,哈尔滨150030
• 出 处: 中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会
• 发表日期: 2012年期

　　猪源Cathelicidins抗菌肽PMAP-36是由36个氨基酸组成的猪源骨髓抗菌肽,有研究称该抗菌肽能在C-末端的半胱氨酸形成二硫键并以二聚体的形式储存在外周白血球中。本试验在毕赤酵母表达系统中表达PMAP-36及其反相平行二聚体(PMAP-36)2,旨在对比其生物学活性并通过优化表达条件来提高表达量,同时研究它们对肉仔鸡生长和免疫性能的影响。结果显示：根据已报道的PMAP-36氨基酸序列及毕赤酵母的密码子偏爱性设计PMAP-36与(PMAP-36)2的目的基因。目的基因与表达载体pPICZαA分别经双酶切后连接构建重组表达载体。测序结束后,以pPICZαA空载体作为对照,将Sac Ⅰ线性化重组表达载体电转化入毕赤酵母GS-115中,通过PCR和抗生素抗性筛选筛出阳性重组毕赤酵母工程菌。根据毕赤酵母表达手册,以甲醇诱导方式诱导阳性菌进行表达,并优化表达条件。通过Tricine-SDS-PAGE分析表明,目的基因成功表达。表达产物上清液的抑菌试验表明,金黄色葡萄球菌等多种细菌受到抑制,而且PMAP-36以及(PMAP-36)2的抑菌效果差异不明显,室温放置24h发现抑菌圈大小无变化。表达样冻干浓缩后的溶血试验发现,两种抗菌肽均无溶血活性。选取相同体重的7日龄AA肉仔鸡150只,采用单因子完全随机区组设计,各处理组依次为PMAP-36组、(PMAP-36)2组、空载体对照组、抗生素组和空白对照组,每组6个重复,每个重复5只鸡,研究表达产物对7 ～21日龄肉仔鸡生长和免疫性能的影响。结果提示,PMAP-36和(PMAP-36)2的毕赤酵母表达产物有促进肉仔鸡生长的趋势,但差异不显著；肉仔鸡免疫器官(脾脏、胸腺、法氏囊)指数显著提高,同时血清IgG、IgM水平有所提高但未达到显著水平；对盲肠内容物菌群分布以及十二指肠、回肠发育有积极影响。