【摘 要】
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目的:免疫荧光分析软件检测内毒素(LPS)诱导原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NF-κB信号通路的活化.方法:原代分离HUVECs,随机分为6组:空白对照组(无LPS处理)、LPS刺激组(1ug/ml LPS分别刺激0.5h,1h,2h和4h),和阴性对照组(无LPS处理,无一抗处理),运用自主研发设计的免疫荧光分析软件定量分析胞浆胞核内p65蛋白定位和表达变化.蛋白质免疫印迹法(Wester
【机 构】
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330006 南昌大学第一附属医院烧伤研究所;南昌大学研究生院 南昌大学研究生院
【出 处】
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2014感染伤口的防治与修复研讨会、中国金属学会冶金安全与健康分会烧伤外科学专业委员会年会、华北地区烧伤与整形外科学术年
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目的:免疫荧光分析软件检测内毒素(LPS)诱导原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NF-κB信号通路的活化.
方法:原代分离HUVECs,随机分为6组:空白对照组(无LPS处理)、LPS刺激组(1ug/ml LPS分别刺激0.5h,1h,2h和4h),和阴性对照组(无LPS处理,无一抗处理),运用自主研发设计的免疫荧光分析软件定量分析胞浆胞核内p65蛋白定位和表达变化.蛋白质免疫印迹法(Western Blot)验证荧光分析软件结果.
结果:随着LPS刺激的时间增加肉眼荧光镜下NF-κB/p65总蛋白表达增加,核转位于2h和4h组明显;荧光分析软件检测图像结果提示,各LPS组细胞NF-κB/p65总蛋白表达上调,于4h组平均值最高,2h为NF-κB/p65核转位现象高峰点;Western blot显示的表达下降和p-IKKβ表达上调,提示LPS可诱导NF-κB信号通路的激活,NF-κB/p65蛋白随LPS刺激时间延长NF-1κB/p65总蛋白表达有增加趋势,2h稍有下降,4h表达明显升高,与荧光分析软件分析结果基本一致.
结论:LPS诱导原代HUVECs NF-κB/p65核转位高峰点为2h,自主研发的免疫荧光分析软件可协助相对定量分析荧光图片.
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