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目的：建立痰液诱导及诱导痰的处理方法;探讨矽肺患者及接尘工人诱导痰中炎症细胞及炎性介质含量变化,确定矽肺早期炎性标志物,建立矽肺早期无损伤的检测方法.
方法：1、痰液诱导和处理方法优化：选择Ⅰ期矽肺住院病人30名为研究对象,用不同浓度的高渗盐溶液对研究对象进行不同时间痰液诱导,观察不同诱导方法对痰液诱导质量的影响;对诱导合格的痰液分别用不同倍数的DTT及不同的水浴时间进行处理,优化诱导痰液的处理方法.2、矽肺患者及接尘工人诱导痰中炎症细胞及炎性介质水平变化：分别选择矽尘接触工人、矽肺患者和无粉尘接触史后勤人员为接尘实验组、矽肺实验组和对照组,对三组人员进行痰液诱导,测定诱导痰中的TNF-α、IL-6、IL-16、MCP-1、MIP-1α含量;进行痰液涂片,用光学显微镜观察诱导痰中炎症细胞(中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、尘细胞)数量变化;同时测定研究对象的用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气量(FEV1)、第一秒用力呼气量占预计值的百分比(FEV1/FVC)、FEF25-75、MEF25、MEF50、MEF75及最大用力呼气流速(PEF);进行炎症细胞、炎性介质与接尘工龄和以上肺功能指标的相关性分析.
结果：⑴3％、4％浓度诱导成功率显著高于5％浓度诱导成功率,结果具有显著性差异(P＜0.05),3％与4％浓度诱导成功率无显著性差异(P＞0.05);水浴时间超过30min后痰液溶解较为完全,处理后较稀薄,处理20min的痰液未完全溶解,粘稠度较高;不同体积的DTT溶解方式处理结果并无明显差异(P＜0.05).⑵接尘组及病例组总细胞数显著高于对照组,差异有显著性(P＜0.05);接尘组与病例组之间总细胞数无明显差异(P＞0.05);接尘组及病例组中性粒细胞数低于对照组,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05);接尘组及病例组淋巴细胞数高于对照组,且与对照组相比有显著性差异(P＜0.05);接尘组与病例组之间中性粒细胞数、淋巴细胞数均无明显差异(P＞0.05);三组间单核细胞数无明显差异(P＞0.05);尘细胞数却有显著性差异(P＜0.05).⑶病例组诱导痰中TNF-α水平明显高于其他两组,差异均有显著性意义(P＜0.05);接尘组与对照组间TNF-α含量差异无显著性(P＞0.05).⑷三组研究对象诱导痰中IL-6含量无差异(P＞0.05).⑸矽肺患者和接尘工人组诱导痰中IL-16含量明显高于对照组(P＜0.05;P＜0.05),病例组诱导痰中IL-16含量高于接尘组中IL-16水平,二者有显著性差异(P＜0.05).⑹接尘组和病例组诱导痰中MCP-1含量均高于对照组MCP-1含量,病例组诱导痰中MCP-1含量高于接尘组含量,三组间MCP-1含量有显著性差异(P＜0.05;P＜0.05).MCP-1与白细胞总数、中性粒细胞、单核细胞、尘细胞具有显著的相关性(P＜0.05),与淋巴细胞无相关性(P＞0.05).⑺病例组、接尘组与对照组之间MIP-1α水平无显著性差异(P＞0.05).⑻TNF-α与FVC、FEV1、MEF25、MEF50、MEF75均呈明显的负相关(P＜0.05);IL-6与FEV1、FEV1/FVC呈明显的负相关(P＜0.05);IL-16与FVC、FEV1、FEV1/FVC、FEF25-75、PEF皆呈明显的负相关(P＜0.05);MCP-1、MIP-1α与各肺功能指标均不呈明显的相关性(P＞0.05).⑼TNF-α、IL-16、MCP-1与接尘工龄有明显的相关性(P＜0.05).
结论：1.痰液诱导技术可以作为一种无创伤、安全、简便、实用的试验方法用于收集研究对象的痰液,且收集的样品质量较好,代表性较高;通过对痰液处理方法的优化,所得实验数据能够反映矽肺发生发展过程中肺组织的炎症反应状况.2.诱导痰中淋巴细胞、尘细胞数量以及TNF-α、IL-16、MCP-1水平的变化可以反映矽肺进展中肺部炎症反应程度的变化;IL-6含量与研究对象肺功能指标有较好的相关性,能够反映其肺功能下降的程度,可作为矽肺无损伤检测的一个参考指标;TNF-α、IL-16、MCP-1可以作为矽肺早期炎症无损伤检测的生物标志物.