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该研究大已扩增抗人CD3抗体重、轻链可变区基因的基础上,采用重叠延伸拼接法构建了V〈,H〉-Linker-V〈,L〉型的单链抗体基因。将构建的单链抗体基因克隆到融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,IPTG诱导表达GST-ScFv融合蛋白,SDS-FAGE分别在52000左右出现新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白40℅。经初步纯化和复性后用GST亲和色谱纯化,再经凝血酶水解获得抗人CD3 ScFv,竞争结合抑制实验证明该产物具有CD3抗原亲和活性。