鸡γ-干扰素基因的瞬时表达及其抗病毒活性检测

• 作 者: 殷喆[1]张文龙[1]陈伟业[2]刘胜旺[2]步志高[2]王君伟[3]吴东来[2]
• 机 构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；东北农业大学 动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030
• 出 处: 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
• 发表日期: 2008年期

采用PCR技术从质粒pET-ChIFN-γ中扩增得到IFN-γ基因，将其亚克隆到真核表达载体pCAGGS中。将鉴定正确的克隆命名为pCAGGS-ChIFN-γ，体外转染CEF细胞，24h后经间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western-blot)检测，表达蛋白具有良好的免疫原性。然后利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水疱口炎病毒(VSV*GFP)在CEF细胞上检测表达的ChIFN-γ抗病毒活性(AVA)，经检测其抗病毒活性为2×103AU/mL，并且其活性可被抗鸡IFN-γ的多克隆抗体阻断。结果表明：ChIFN-γ在鸡胚成纤维(CEF)细胞中成功表达，并且表达的ChIFN-γ具有良好的抗病毒活性。