串联亲和纯化技术联合质谱鉴定乳腺癌细胞中LOX相互作用蛋白

• 作 者: 刘剑仑;刘侠;韦薇;杨华伟;蒋奕;唐玮;
• 机 构: 广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科 530021
• 出 处: 第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议
• 发表日期: 2014年期

本文构建带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的重组赖氨酰氧化酶(Lysyl oxidase,LOX)蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌MDA-MB-231细胞中表达,利用StrepⅡ/FLAG标签纯化富集LOX的复合体,经LC-MS/MS进行蛋白鉴定,结果用于生物信息学分析和进一步研究LOX及其相互作用蛋白质在乳腺癌中的功能.研究表明，GV303/LOX-SF的构建，使带SF融合标签的LOX蛋白在MDA-MB-231中的成功表达及纯化，在鉴定到的425个蛋白，分析结果提示LOX所在的功能类共有20个，质谱中的蛋白大部分与Cancer、InfectiousDisease、Hematological Disease、Immunological Disease等疾病相关。鉴定到的蛋白可信度排前的参与mTOR Signaling、Remodeling of Epithelial AdherensJunctions、Actin Cytoskeleton Signaling信号通路，提示LOX与肿瘤细胞的侵袭和转移有关。质谱蛋白相互之间的作用依据分子功能划分成16个网络，其中LOX直接参与了数据库中之一的功能网络。另外同质谱鉴定到的蛋白进行匹配，为筛选和研究赖氨酰氧化酶及其相互作用蛋白在乳腺癌细胞系内的功能奠定了实验基础。