【摘 要】
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蛋白质组学研究中技术平台的建立是目前分析化学面临的巨大挑战.其难点主要包括两个方面:一方面是复杂生物样品的分离;另一方面是生物质谱的检测灵敏度.而最关键的因素是蛋白
【机 构】
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军事医学科学院放射医学研究所基因组学与蛋白质组学研究室,北京,100850
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蛋白质组学研究中技术平台的建立是目前分析化学面临的巨大挑战.其难点主要包括两个方面:一方面是复杂生物样品的分离;另一方面是生物质谱的检测灵敏度.而最关键的因素是蛋白质混合物和多肽混合物的高效分离.目前对整体蛋白质分离所采用的主要手段是色谱方法、凝胶电泳以及它们的有效组合.由于只采用一维色谱技术或多维色谱技术的分离效率无法与两维凝胶电泳媲美,而两维凝胶电泳又对高分子量、强疏水性和等电点过高或过低的蛋白质存在歧视性,因此如何扬长避短,发挥两类高效分离方法的优势成了目前蛋白质组学研究中需要探索的问题之一.本工作就是结合了色谱和凝胶电泳方法的优点,即反相色谱(RPLC)可以克服两维凝胶电泳方法中第一维等电聚焦存在的缺陷,并具有高的分离效率,结合十二烷基硫酸纳-聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)兼容性好的优势,组成RPLC-SDS-PAGE多维分离技术,对国际人类蛋白质组织(HUPO)提供的法国人肝脏组织样品提取的蛋白质混合物进行了分离,并通过胶上酶切和进一步对多肽混合物的纳升级毛细管液相色谱-串联质谱联用分析,获得了法国人肝脏组织的蛋白质表达谱,为规模化研究人肝脏蛋白质组奠定了基础.
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