【摘 要】
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体外培养造血干/祖细胞(Hematopoietic stem/progenitor cells，HS/PCs)时,只有旁分泌而没有近分泌的间接接触式共培养效果优于非接触共培养,虽然非接触共培养也只有旁分泌.研究者们常使用transwell 小室实现造血干/祖细胞和基质细胞的间接接触共培养,然而这种共培养方式中两种细胞之间的距离是固定的.为了研究期待血来源的造血干/组细胞和人脂肪干细胞共培养时最佳的
【机 构】
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大连理工大学干细胞与组织工程研发中心,辽宁省大连市,116024 大连医科大学附属第一医院血液科,
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体外培养造血干/祖细胞(Hematopoietic stem/progenitor cells，HS/PCs)时,只有旁分泌而没有近分泌的间接接触式共培养效果优于非接触共培养,虽然非接触共培养也只有旁分泌.研究者们常使用transwell 小室实现造血干/祖细胞和基质细胞的间接接触共培养,然而这种共培养方式中两种细胞之间的距离是固定的.为了研究期待血来源的造血干/组细胞和人脂肪干细胞共培养时最佳的作用距离,本文设计了一种共培养距离可调的新的transwell 共培养方法.采用不同规格的砂纸打磨,经高精度游标卡尺测量,使两种细胞之间的有效接触间距为10-450μm 不等.然后以人脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)为基质细胞,分别考察了造血干/祖细胞和脂肪干细胞在不同的作用距离下共培养情况.共培养时先将ADSCs以2×105cells/ml 密度接种到六孔板中,然后将收获的MNCs以1×106cells/ml 密度接种到transwell 小室内,再将transwell 小室放到调节好HSCs和ADSCs 之间的作用距离的六孔板中进行7天的共培养.其间每24 小时进行细胞计数,观察细胞形态.培养7天后对造血单个核细胞表面抗原CD34+、CFU-GM 集落扩增倍数进行了检测;同时也对人脂肪来源干细胞表面抗原(CD13、CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD105、CD166、HLA-DR)及其多向分化潜能(成骨、成软骨、成脂肪)进行分析以鉴定其干细胞性能.结果表明,通过transwell 共培养,细胞之间在作用距离为350μm时造血干/祖细胞的扩增效果最好,其中造血单核细胞(mononuclear cells，MNCs)扩增了15.1±0.2 倍，CD34+扩增了5.0±0.1 倍;扩增的脂肪干细胞表达CD29、CD44、CD166,而不表达CD34、CD45,且在适当诱导条件下可以向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化.
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