【摘 要】
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微小RNAs(miRNAs)是指含有18-25个核苷酸的可调控动植物体内基因表达的短链RNA，本文中初次建立了一种超灵敏的三明治类型的分析方法用于探测血液中低含量的miRNAs。首先，原位结合碱性磷酸酶包裹的金纳米簇，形成碱性磷酸酶-金纳米簇复合材料。相比于天然的碱性磷酸酶，碱性磷酸酶-金纳米簇的催化活性得到了明显提高。进而提出了三明治类型的杂交方式:使用碱性磷酸酶-金纳米簇标记DNA检测探针，与
【机 构】
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山东省曲阜师范大学化学与化工学院,山东省生命有机分析重点实验室,曲阜,273165 曲阜师范大学校
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微小RNAs(miRNAs)是指含有18-25个核苷酸的可调控动植物体内基因表达的短链RNA，本文中初次建立了一种超灵敏的三明治类型的分析方法用于探测血液中低含量的miRNAs。首先，原位结合碱性磷酸酶包裹的金纳米簇，形成碱性磷酸酶-金纳米簇复合材料。相比于天然的碱性磷酸酶，碱性磷酸酶-金纳米簇的催化活性得到了明显提高。进而提出了三明治类型的杂交方式:使用碱性磷酸酶-金纳米簇标记DNA检测探针，与磁性颗粒负载的DNA捕获探针通过磁分离从血液中捕获的目标miRNA进行杂交，然后使用DNA连接酶的催化连接作用将与目标链互补的两个DNA探针连接，通过碱性磷酸酶-金纳米簇水解磷酸化抗坏血酸的产物还原银，检测银信号进而得出miRNAs含量。碱性磷酸酶-金纳米簇在此作为双催化剂分别催化碱性磷酸酶底物的去磷酸化反应以及金纳米簇加速银沉积反应。DNA连接酶的使用，提高了短链探针对大量银沉积的承受能力，进一步允许了银沉积信号放大。因此通过电化学输出装置检测的碱性磷酸酶-金纳米簇催化银沉积信号达到了最大限度的放大。同时，由于DNA连接酶连接的选择性，使得精确检测miRNA中的突变水平成为可能。
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