【摘 要】
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杆状病毒是一种广泛分布于自然界且专一性感染昆虫的病原微生物.作为一类重要的微生物杀虫剂,对环境无污染,对天敌和人畜安全且能引起昆虫流行病的发生,可有效地控制农林
【机 构】
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中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东广州510275
【出 处】
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第六届全国农业微生物研究及产业化研讨会、第十五届全国杀虫微生物学术研讨会、第十一届全国虫生真菌学术研讨会
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杆状病毒是一种广泛分布于自然界且专一性感染昆虫的病原微生物.作为一类重要的微生物杀虫剂,对环境无污染,对天敌和人畜安全且能引起昆虫流行病的发生,可有效地控制农林害虫的发生,是控制害虫种群数量的重要生物因素,具有化学杀虫剂无法比拟的优势,所以在害虫的生物防治中具有广阔的应用前景.对杆状病毒复制和包装的研究,可为改良杆状病毒提供关键的理论基础.而为了能更好的解答杆状病毒复制过程中的关键步骤核衣壳是怎么装配的这个问题,我们对杆状病毒核心基因38K 进行了功能研究.38K 编码病毒核衣壳结构蛋白,能与主要的衣壳蛋白VP39 相互作用,还与自身,以及其他衣壳蛋白VP1054 和VP80 起相互作用.其缺失后只能产生空的长管状衣壳结构,病毒DNA 不能被压缩包装进入衣壳,导致病毒核衣壳装配的中断.生物信息学分析发现38K 属于卤代酸脱卤素酶超家族成员(haloacid dehalogenase-like superfamily,HAD-like superfamily),具有该家族成员四个典型的模序,推测38K 可能为磷酸酶.我们将四个模序分别进行点突变,构建4 株点突变重组病毒并转染Sf9 细胞,发现这四个模序对病毒的增殖至关重要；通过透射电镜,观察到点突变重组病毒都产生了空的长管状衣壳结构,也说明了这四个模序均参与了核衣壳的装配.为了研究38K 参与病毒核衣壳装配的分子机制,我们检测了38K 缺失型和点突变型重组病毒转染的Sf9 细胞中病毒DNA 结合蛋白P6.9 的磷酸化水平.结果显示38K 缺失型和点突变型重组病毒均使P6.9 的磷酸化程度升高.进一步利用质谱技术检测38K缺失型病毒中P6.9 的磷酸化位点,发现缺失型病毒中P6.9 的磷酸化位点增加.我们将P6.9 中由38K 介导的去磷酸位点进行模拟磷酸化突变,发现模拟磷酸化突变体阻断了病毒的复制.因此,38K通过介导P6.9 磷酸化位点的去磷酸化,调控病毒DNA 压缩包装进入衣壳.
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