【摘 要】
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目的：构建α-烯醇化酶(alphaenolase,ENO1)重组表达质粒,并研究其表达形式. 方法：以人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)总RNA为模板合成cDNA;
【机 构】
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湖南中医药大学第一附属医院医学检验中心
【出 处】
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第一次全国中西医结合检验医学学术会议
论文部分内容阅读
目的：构建α-烯醇化酶(alphaenolase,ENO1)重组表达质粒,并研究其表达形式.
方法：以人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)总RNA为模板合成cDNA;根据ENO1基因序列,设计上下游引物,以cDNA为模板,经多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增得到目的基因片段ENO1;用T4DNA连接酶连接酶切产物和原核表达载体pET28(a),获得重组表达质粒pET28(a)-ENO1;将pET28(a)-ENO1在BL21(DE3)E.Coli.大肠杆菌中诱导表达,分别取菌液上清和沉淀进行SDS-PAGE电泳,确定重组质粒的表达形式.
结果：重组表达质粒pET28(a)-ENO1中的ENO1测序结果与GeneBank上的序列一致;pET28(a)-ENO1以可溶性表达为主.
结论：ENO1重组质粒的成功构建及其可溶性为主的表达形式的确定,为研究ENO1的生物学活性及功能奠定了基础.
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