5-磷酸二酯酶的纯化及水解核酸RNA的研究

• 作 者: 华洵璐 张一平 匡群 史济筠 何义进
• 机 构: 江苏省苏微微生物研究有限公司无锡214063江苏省宜兴市天石饲料有限公司宜兴214258中国水产科学院淡水渔业研究中心无锡214081
• 出 处: 核苷酸及衍生物开发与应用技术交流研讨会
• 发表日期: 2010年10期
• 关键词: 核酸 5'-磷酸-二酯酶 麦芽根 核苷酸 超滤 盐析

目的：获得高活力5-磷酸二酯酶液、提高核酸RNA酶解效率。
方法：采用超滤和盐析技术对从麦芽根浸提液中纯化5-磷酸二酯酶工艺进行研究，采用单因子试验法优化酶解工艺条件。
结果：浸提液依次经过5万Da超滤膜浓缩、40％饱和度硫酸铵盐析、5万Da超滤膜脱盐后，酶活力可达1500U/ml；第一次超滤膜透过液可作为浸提液循环使用，酶活力是水浸提的1.15倍；第二次超滤膜透过液浓缩5倍后，可回收56.46％硫酸铵，浓缩母液可按1：2比例循环使用；在底物浓度5.8％、酶用量8％、反应时间2h条件下，RNA酶解率可达95％。
结论：本文初步建立了适合工业化规模的核苷酸生产新工艺。